ریل تایم پی اس آر نوعی از آزمایش پی اس آر استاندارد است. با آزمایش فوق میزان محصولات تولید شده هم زمان با انجام فرآیند بررسی می‌شوند. می توان آن را تکنیکی برای بررسی‌های کمی و بیان ژن معرفی نمود. توجه نمایید که این یک روش بسیار موثر در تعیین تعداد ویروس‌های موجود در یک نمونه است. ویژگی کلیدی این ریل تایم فراهم شدن امکان بررسی تکثیر قطعات DNA با انجام شدن همزمان آزمایش با استفاده از گزارشگرهای فلوئورسنت است.
آزمایش پی اس آر چیست؟
از زمان معرفی آزمایش پی اس آر تا کنون، این آزمایش کاربردهای گسترده‌ای در زمینه‌های کلون کردن ژن، نقسه برداری ژنی، تشخیص جهش‌ها، توالی یابی دی ان آ و تعیین هویت افراد داشته است. آزمایش ی اس آر همچنین می‌تواند در سنجش میزان بیان ژن‌ها مورد استفاده قرار گیرد و مثالی برای این کاربرد تکنیک Competitive PCR است. این روش از جمله روش‌هایی است که برای تشخیص و سنجش مقدار MRNA تولید شده در زمان رو نویسی یک ژن خاص به کار گرفته می‌شود. محصولاتی که تولید شده است طی Competitive PCR در انتهای فرآیند یا طی الکتروفورز بررسی می‌شوند. توجه داشته باشید که در زمان واکنش آن‌ها امکان آنالیز وجود ندارد. مشاهده نتایج آزمایش فقط بعد از کامل شدن واکنش و انجام یک سری از فرآیندهای دیگر ممکن خواهد بود.
در روش ریل تایم پی اس آر نیازی به انجام دستکاری‌های مختلف نیست و این موضوع یکی از مزایای این تکنیک است که همواره خطر آلودگی را نیز کاهش می‌دهد. از مزایای دیگر آزمایش ریل تایم سنجش میزان بیان ژن‌ها و حساسیت آن‌ها است. در واقع به راحتی می‌تواند یک کپی از رو نوشت مورد نظر را نیز شناسایی نماید.
روش‌های انجام ریل تایم پی اس آر
- تکنیک Quantitative PCR در این تکنیک امکان پی بردن به مقدار نوکلئیک اسید اولیه موجود در نمونه برای ما فراهم می‌شود. مقدار محصولی که پس از طی شدن تعداد چرخه‌های مشخصی از پی اس آر تولید می‌شود بستگی به میزان نوکلئیک اسید اولیه دارد. اگر در ابتدای پی اس آر مقدار این مولکول‌ها کم باشد، در نتیجه محصول کمی تولید می‌شود و برعکس اگر مولکول‌های شروع کننده واکنش زیاد باشند مقدار محصولات تولید شده زیاد خواهد بود. این موضوع، اساس تعیین مقدار مولکول‌های اولیه حاضر در عصاره سلولی را تشکیل می‌دهد. میزان محصولاتی که در زمان یک آزمایش پی اس آر تولید می‌شوند با میزان محصولات تولید شده در آزمایش‌های پی اس آر با مقداری نوکلئیک اسید آغاز کننده مشخص مقایسه می‌گردد. در روش‌های اولیه quantitative pcr الکتروفورز در ژل آگارز به منظور انجام چنین مقایسه‌هایی به کار می‌رود. پی از رنگ آمیزی ژل مورد نظر رنگ نوارهای از پیش تعیین شده با میزان شدت نوار آزمایش مقایشه می‌گردد تا بیشترین شباهت تعیین شود و از روی آن مقدار نوکلئیک اسید اولیه نمونه مورد نظر به دست آید. این موضوع از آن جایی سر چشمه می‌گیرد که وجود تفاوت‌های قابل توجه در مقدار نوکلئیک اسید اولیه خود به شیوه تفاوت‌های کم در شدت رنگ نوار محصولات در الکتروفورز نشان می‌دهند.
- هیبریداسیون پروب به هدف
هر دو روش در واقع استفاده از رنگ یا پروب امکان سنجش فلوئورسنت را به دنبال تولید محصول پی اس آر فراهم می‌کند. این تکنیک‌ها وسیله قابل اعتمادی برای در نظر گرفتن و سنجش اسید نوکلئیک‌ها و نیز تشخیص حضور یا عدم حضور یک توالی خاص هستند. انواع متنوعی از سخت افزارها برای ریل تایم پی اس آر وجود دارد. لازم به ذکر است که برخی دستگاه‌های پر سرعت می‌توانند آزمایش‌های پی اس آر را در کمتر از 30 دقیقه انجام دهند. ریل تایم به قدرت به سمت اتوماسیون حرکت نموده به نوعی که به عنوان بهترین روش انجام Quantitative PCR تبدیل شده است. دستگاه‌ها و لوازم مورد نیاز اولیه انجام این فرآیند بسیار گران بوده است؛ اما دستگاه‌های دسل دوم، با قیمت سیار مناسب‌تر به صورت تجاری در دسترس است.
نتیجه گیری:
دستگاه ریل تایم پی اس آر جهت بررسی میزان بیان ژن‌های موجودات زنده توسعه یافته است. این دستگاه یکی از ابزارهای آزمایشگاهی مهم محسوب می‌شود. این محصول را می‌توان از فروشگاه‌ها و سایت‌های مختلفی مثل نیازمندی‌های علو پزشکی با قیمتی مناسب تهیه نمود. دستگاه پی اس آر ساده یک محدودیت به وجود آورده است و آن محدودیت عدم توانایی بررسی کمی بیان یک ژن است. برای کسب اطلاعات بیشتر در رابطه با این محصول و تفاوت‌های آن با سایر نوع‌ها تنها کافیست با یکی از شماره تماس‌های مجموعه نیازمندی‌های علوم پزشکی تماس حاصل نمایید و تمام سوالات خود را از کارشناسان حرفه‌ای این مجموعه بپرسید.
